流式细胞分选仪
August 1, 2025
1）仪器详细参数
- 两激光七色，波长分别为 488nm（蓝激光）、 633nm（红激光）；7色是指 7 个荧光检测通道 + FSC/SSC。
- 为保护细胞活性，所有激光功率≤50mW，避免大功率灼伤分选细胞活性。激光光路固定校准，无需人工调试校正光路。
- 信号收集方式：先收集信号较弱的长波长信号，再收集信号较强的短波长信号；荧光发射光到达所有荧光通道检测器所经过的透射次数≤2。
- 最大检测速度：≥100000细胞/秒，最大分选速度：≥70000细胞/秒；
- 鞘液压力范围：≥5-75PSI，且连续可调。
- 独立液流车系统，可至少承载：≥10L不锈钢鞘液桶、≥5L不锈钢乙醇桶、≥10L废液桶、以及不少于3个≥5L辅助清洁液桶。液流车可自行提供空气压力和真空状态，并带有液面感应器，可自主供气，无需外接气瓶。须提供产品彩页或技术白皮书或使用说明书或检验报告进行佐证。
- 需具有质控系统，可实现仪器每个荧光通道Qr值和Br值的检测、以及各荧光通道不少于三种亮度微球的全面性能检测，可自动检测并校正各荧光通道光电倍增管电压的微小变化。
- 所有荧光通道具有独立的长通和带通滤光片，非共用，确保各个荧光道道检测的准确性。
- 无需定期更换芯片等耗材。
- 荧光检测器采用高性能光电倍增管检测器，荧光灵敏度：FITC≤90MESF、PE≤30MESF；
- 喷嘴种类：至少有70um、85um、100um、130um四种；
- 同一个样本单次获取样本数据时可设置不少于5个阈值。
- 分选通路：≥4路；更换喷嘴后重新开始分选时间≤5分钟。
- 需具有无菌分选模式，至少支持1.0ml微量管、流式管、15ml离心管进样，具有进样端样本过滤器。
- 需具有液流自动监测功能：可进行液流断点自动监测，自动监测细胞堵塞。
- 可将每一个液滴按≥16等份进行监视，进行细胞在液滴中的位置判断，精准分选目标细胞。
- 需具有电子细胞减速系统，降低包含目标细胞的液滴速度，避免细胞与收集管高速撞击，提高分选活性。
- 温度控制系统：由软件控制，可调节温度至少包含4±1度、20±1度、37±1度或42±1度。
2）可开展的实验
- 细胞亚群分析/分选：免疫分型（如 CD4/CD8、CD19、CD56 等），常规 6–7 marker 方案。
- 转基因标记检测：GFP 等荧光蛋白阳性细胞的检测与分选。
- 细胞周期/凋亡：PI、Annexin V-FITC/PE 等经典方案。
- 多色免疫表型：5–6 色 panel 覆盖多数基础免疫学研究。
- 后续应用：分选细胞可用于培养、转录组/单细胞组学、功能验证等。
3）激光使用说明
- 488 nm（蓝光激光）：常用来激发 FITC、GFP、PE、PerCP、PerCP-Cy5.5、PE-Cy7 等。
- 633 nm（红光激光）：常用来激发 APC、APC-Cy7、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 700 等。
- 另含 FSC/SSC 用于大小与内含物散射。
4）BD 两激光七色流式细胞分选仪荧光染料推荐搭配表
| 激光器 | 通道滤光片（常见配置） | 推荐荧光染料/蛋白 | 备注 |
|---|---|---|---|
| 488 nm 蓝光 | 530/30 nm | FITC, GFP, Alexa Fluor 488 | 经典绿色荧光，常用于抗体或 GFP 转基因蛋白 |
| 575/26 nm | PE, DsRed, R-PE | 高亮度，常用于低丰度抗原标记 | |
| 610/20 nm | PE-Texas Red, PE-DsRed Tandem | 与 PE 区分，避免光谱重叠 | |
| 695/40 nm | PerCP, PerCP-Cy5.5 | 常见的远红检测通道 | |
| 780/60 nm | PE-Cy7 | 高亮度远红，注意光漂白和补偿 | |
| 633 nm 红光 | 660/20 nm | APC, Alexa Fluor 647 | 经典红色荧光 |
| 780/60 nm | APC-Cy7, Alexa Fluor 750 | 远红通道，信号亮，适合低丰度标记 |
✅ Panel 设计建议
- 优先选用亮度高的染料标记低丰度抗原（如 PE、APC）。
- 避免光谱重叠严重的搭配（如 PE 与 PE-Texas Red）。
- GFP 实验走 488 nm-530/30 通道，不与抗体染料冲突。
- 推荐 6–7 色 panel：FITC、PE、PerCP-Cy5.5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7 + 1 个额外染料。
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